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Práctica 3 Precipitación, separación y punto isoeléctrico de proteínas
Materia: Bioquímica
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Universidad: Instituto Politécnico Nacional
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Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica No. 3 Precipitación, separación y punto
isoeléctrico de proteínas.
INTRODUCCIÓN
También denominado punto isotónico al pH que
se obtiene cuando una proteína es disuelta
ausente de cualquier ion.
En la mayor parte de las proteínas la solubilidad
está dada por la interacción hidrofílica de las
moléculas polares del agua y los grupos ionizados
de las proteínas. Los factores principales que
afectan la solubilidad de las proteínas son: fuerza
iónica, pH, temperatura y la constante dieléctrica
del disolvente. La solubilidad de una proteína a una
determinada fuerza iónica varía con las clases de
iones en solución; la solubilidad de una proteína a
baja fuerza iónica se incrementa por lo general con
la concentración salina, mientras que, a fuerzas
iónicas elevadas se reduce la solubilidad de las
proteínas, como la mayoría de las sustancias.
Los solventes orgánicos suelen ser buenos
precipitantes de proteínas porque sus bajas
constantes dieléctricas reducen el poder de
solvatación de sus soluciones acuosas hacia los
iones disueltos.
OBJETIVO
Obtener el punto isoeléctrico de la insulina
mediante el análisis de sus propiedades de
solubilidad a diferentes valores de pH.
ANÁLISIS DE TÉCNICA
Salting out: La adición de sales elimina el agua
de la proteína hidratada, dejando las regiones
hidrofóbicas en libertad de combinarse
intermolecularmente.
Desnaturalización: Procedimiento por el cual se
busca la precipitación de una proteína a través de
la alteración estructural por medios físicos o
químicos para eliminar su estructura
tridimensional al eliminar estructuras
secundarias, terciarias y cuaternarias.
Precipitación por metales pesados: En un medio
alcalino, las proteínas son aniones, por lo qué, los
cationes en sales de metales pesados pueden formar un
complejo con las moléculas de la proteína y precipitar
como proteinatos metálicos.
RESULTADOS
Biuret Interpretación
Sobrenadante positiva Positiva porque
hay proteínas
Precipitado 1 positiva Positiva porque
hay proteínas
Filtrado negativa Las proteínas
precipitaron,
están en el
precipitado 2
Precipitado 2 positiva Positiva porque
hay proteínas.
Tabla 1 Salting out.
Tabla 2 Precipitación por efecto del pH y disolventes.
Tubo 1 2
Clara de huevo
filtrada 2.0 2.0
Etanol ml 1.0 -
Agua ml - 1.0
observaciones Precipitó Sin precipitado
Tabla 3 Precipitación por modificación constante
dieléctrica
Tubo 1 2 3 4 5
Clara de huevo
filtrada ml
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
HgCl2 5% 0.2
5
- - - -
AgNO3 2% - 0.2
5
- - -
Pb(C2H3O2)2 2% - - 0.2
5
- -
NaCl 5% - - - 0.2
5
-
Agua - - - - 0.2
5
Observaciones + + + - -
Tabla 4 precipitación por metales pesados
Tubo Ac. Acetato Insulin pH Observacione
Tubo 1 2 3
Clara de huevo
filtrada
3.0 ml 3.0 ml 3.0 ml
HCl 0.1 ml 1ml - -
NaOH 0.1 ml 1ml
Regulador de
acetatos 0.1M
(4.7ml)
- - 1ml
Agua - - -
Observaciones Precipitación
media
Precipitación
menor
Precipitación
mayor
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