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Enzimas DE Restricción

Enzimas de Restricción

Materia

Bioquimica

156 Documentos

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Universidad

Universidad de Carabobo

Año académico: 2020/2021

Subido por:

María Saturna Escalona

Universidad de Carabobo

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ENZIMAS DE

RESTRICCIÓN

2021

Laboratorio de Bioquímica

María S. Escalona V.

Prof.: Arnaldo Armado.

Universidad de Carabobo

Facultad Experimental de Ciencias y Tecnología

Departamento de Química

Unidad de Bioquímica

Autores:

María Escalona

Profesor:

Lic. Química Arnaldo Armado

Naguanagua, marzo de 2021.

ENZIMAS DE

RESTRICCIÓN

Restricción: este sistema le permite a la bacteria protegerse de ADN exógenos para evitar la “promiscuidad” en los intercambios genéticos. Esto le confiere inmunidad frente a bacteriófagos que pudieran poner en peligro la individualidad genética o incluso la vida de la bacteria, lo que se realiza a través de cortes mediante endonucleasas de restricción a los ADN exógenos que ingresen a la bacteria.
Modificación: consiste en la introducción de grupos metilo (CH3-) en determinadas bases dentro de determinadas secuencias del ADN, lo cual está catalizado por una metilasa específica.

Tipos de Enzimas de Restricción (Rivera, O. y Maldonado, I. 2012)

Tipo I y Tipo III:

Tienen actividad de restricción (cortan) y modificación (metilan).
Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento, las Tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Las Tipo III cortan de 5-8 bases antes o después de la secuencia que reconocen.
Necesitan ATP para moverse a través de la molécula de DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte.

Tipo II:

Sólo tienen actividad de restricción.
Cortan de manera consistente y predecible dentro de la secuencia que reconocen. Es decir, se pueden cortar en dos formas: a esto se le conoce como Secuencias Palindrómicas.
Sólo requieren Mg++ como cofactor.
No necesitan ATP.

Nomenclatura de las Enzimas de Restricción

Paso 1: Se nombran en función a la bacteria que ha sido identificada y, por tanto, las tres letras que corresponden al nombre científico del microorganismo (Escherichia coli (Eco); Haemophilus influenzae (Hin); las enzimas HaeII y HaeIII provienen de Haemophilus aegyptius, MboI y MboII de Moraxella bovis).

Paso 2: La cepa o estirpe si la hubiese.

Paso 3: En números romanos, un número para distinguir si hay más de una endonucleasa aislada de esa misma especie. No confundir con el tipo de enzima de restricción.

Paso 4: Todas deberían llevar adelante una R de restricción o un M de metilasa según la función de la enzima, pero generalmente se omite.

Tabla 1. Nomenclatura de las enzimas de restricción.

ENZIMA EcoRI BamHI

Genero de la Bacteria Escherichia Bacillus Especie de la Bacteria coli amyloliquefaciens Cepa de la Bacteria R H

Orden de identificación de la enzima en la bacteria

I (Primera Identificada) I (Primera Identificada)

Se reconoce el sitio y se corta en G ^ AATC (EcoRI)

Implica donde se hace el corte.

Secuencias Palindrómicas (Ramírez, C. 2020)

- BamHI → Sitio de Corte → G ^ GATGG

EXTREMOS PEGAJOSOS STICKY ENDS

- PovII → Sitio de Corte → CAG ^ CTG

EXTREMOS ROMBOS

Aplicaciones de las Enzimas de

Restricción (Rivera, O. y Maldonado, I. 2012)

Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago.
Fragmentar ADN genómico para separación de electroforesis y “Southern Blot”.
Generación de fragmentos para ser usados como sondas marcadas en “Southern”y “Northern” blotting.
Generación de fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados, creación de DNA recombinante.

Factores críticos al trabajar con las Enzimas de

Restricción Rivera, O. y Maldonado, I. 2012

Existen varios factores que son críticos al trabajar con enzimas de restricción y que pueden afectar la actividad de las mismas:

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