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HOJA DE Trabajo DE Aglutinacion
Inmunología I
Universidad Rafael Landívar
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1 SIGNIFICA AGLUTINAR
La aglutinación es un agregado de células o partículas debido a una formación entrelazada. El fundamento de la aglutinación es una reacción inmunoquímica que produce la agregación de partículas o células recubiertas de antígeno o anticuerpo.
La reacción de la aglutinación se EXTRAE en dos fases, la primera en la que se produce el contacto antígeno-anticuerpo sobre la superficie de la partícula (o célula) empleada, y la segunda en la que las partículas se agregan y se puede visualizar la aglutinación. También es un fenómeno natural referente a los glóbulos rojos pero igualmente a los glóbulos blancos y a las plaquetas, que se produce cuando los anticuerpos presentes en el plasma se unen a antígenos transportados por estas células sanguíneas (la aglutinación puede también producirse con bacterias sometidas a la acción de anticuerpos). Se trata, pues, de un proceso a la vez inmunológico (reacción antígeno-anticuerpo) y físico (modificación del medio). Se puede observar generalmente a simple vista cuando se trata de la aglutinación de glóbulos rojos.
2 QUE SE REALIZAN O HACEN LAS PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN
La hemaglutinación indirecta es una técnica de
diagnóstico clínico de laboratorio in vitro que emplea hematíes o eritrocitos (de origen humano o anim al) como partículas marcadoras. Consiste, como en toda técnica de aglutinación indirecta, en provocar la aglutinación de partículas artificialmente recubiertas con antígenos (proceso llamado "sensibilización") mediante la reacción de los anticuerpos presentes en la muestra de estudio (generalmente suero sanguíneo) con dichos antígenos frente a los que son específicos. Por lo tanto, se basa, como toda técnica inmunológica, en la demostración de la reacción antígeno-anticuerpo.
Existe una variante, llamada hemaglutinación indirecta inversa, en la que son los anticuerpos los que se fijan a las partículas marcadoras (los hematíes), siendo esta vez detectados los antígenos solubles presentes en la muestra.
En ambos casos, los hematíes marcadores actúan como portadores pasivos de los antígenos o anticuerpos fijados. Otras posibilidades son la utilización de
partículas inertes (cómo el látex) u otras células como marcadores. Se diferencia fundamentalmente de la hemaglutinación directa (la cual es empleada, por ejemplo, en la determinación de grupos sanguíneos), en que los hematíes- marcadores han sido sensibilizados o unidos de forma artificial al antígeno o anticuerpo.
3 SON LOS TIPOS Y FASES DE LAS REACCIONES DE
AGLUTINACION
Según Coombs existen 3 requerimientos principales en las pruebas de aglutinación:
Disponibilidad de una suspensión estable de células o de partículas.
Presencia de uno o más antígenos cercanos a la superficie.
Conocimiento de que los anticuerpos "incompletos" o no aglutinables no son localizables sin modificación (reacciones antiglobulina).
Clasificación de las reacciones de aglutinación
Aglutinación directa
Un antígeno celular o de partículas insolubles es aglutinado directamente por el anticuerpo. Un ejemplo de esto es la aglutinación de los eritrocitos del grupo A por antisueros antiA, la aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D o la aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-Brucella. Gran cantidad de partículas como pueden ser eritrocitos, bacterias, hongos y virus pueden ser aglutinados por anticuerpos séricos, algunas veces de manera inespecífica y otras muy específica, siendo ésta última, respuesta a una previa inmunización del organismo productor de los anticuerpos séricos. Las pruebas para identificar anticuerpos específicos son llevadas a cabo titulando seriadamente antisueros en diluciones al doble en presencia de una cantidad constante de antígeno.
Aglutinación indirecta
Se refiere a la aglutinación de las células recubiertas de antígeno o a las partículas inertes que son portadoras pasivas de antígenos solubles. Se tienen ejemplos de lo anterior en la utilización de partículas de gelatina en la búsqueda de anticuerpos contra Treponema pallidum por aglutinación pasiva (TPPA), la fijación del látex para VDRL en la sífilis y en la utilización de eritrocitos en la prueba de hemaglutinación indirecta (HAI) en la búsqueda de anticuerpos contra Tripanosoma cruzi, agente causal de la enfermedad de Chagas. De manera alterna, el antígeno puede ser localizado recubriendo partículas de látex o eritrocitos con anticuerpo purificado y practicando la llamada aglutinación inversa.
Hemaglutinación viral
Forma en que se realiza el examen
La prueba depende de qué tipo de muestra se necesite.
Saliva
Orina Sangre Líquido cefalorraquídeo (punción lumbar)
La muestra se envía a un laboratorio donde se mezcla con gotas de látex cubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico. Si la sustancia sospechosa está presente, las gotas de látex se agruparán (aglutinarse).
Los resultados de la aglutinación en látex demoran aproximadamente de 15 minutos a una hora
Prueba de ELISA
La prueba de ELISA (enzyme linked imunosorbent assay) se describió en 1971 por Engvall y Perlman, se fundamenta en la reacción antígeno anticuerpo, utilizando una superficie o fase sólida que pueden ser micropozos o esferas, sobre las cuales se encuentran fijos antígenos o anticuerpos, contra los que actúa un anticuerpo conjugado a una enzima, la cual es capaz de catalizar una reacción con un sustrato que en presencia de un indicador de oxido-reducción se transforma en un producto colorido, para la detección de anticuerpos o antígenos correspondientemente. Existe una amplia variedad de pruebas de ELISA, como son: pruebas directas, indirectas, inhibitorias,
Serología
A través de la serología, se puede estudiar la sangre para determinar qué anticuerpos hay presentes. El llamado examen serológico, de este modo, permite saber cómo el organismo reacciona ante una infección o ante la presencia de patógenos en el flujo sanguíneo.
Para realizar este tipo de exámenes, la serología puede analizar el suero o incluso la totalidad de la sangre. En el caso de que se emplee el suero, lo que se hace es someter la sangre que se coaguló previamente a un proceso de centrifugado que permite la eliminación de las células de la reacción.
Es importante destacar que, cuando existe una infección, los patógenos pueden estimular el organismo para que éste genere anticuerpos. La serología, al estudiar la sangre, permite la detección de estos anticuerpos.
EJEMPLO DE LA PRUEBA DE AGLUTINACION EN LAB. A TRAVES DE LA
IDENTIFICACION DE LEPTOPIRA
Diagnóstico laboratorial de la Leptospirosis puede ser complejo e
implica pruebas que se dividen en dos grupos.
- Pruebas serológicas están diseñada para detectar los anticuerpos antileptospira. (suero, LCR, Orina, Humor, acuoso, leche )
- Diagnóstico bacteriológico: aislamiento del agente etiológico prueba confirmatoria del diagnóstico presuntivo de la Leptospirosis.
Toma de muestra.
́Sangre ́ En la mayoría de los grandes mamíferos, se utiliza la vena yugular o una vena caudal, pero también se pueden utilizar venas braquiales y mamarias. ́ Suero ́ La sangre debe dejarse a temperatura ambiente, pero protegida del calor o frío excesivos, durante 1-2 horas, hasta que el coágulo empiece a retraerse.. Entonces, se recoge el coágulo con una varilla estéril, girándola, y se colocan los frascos en el frigorífico a 4° C. La muestra se puede centrifugar a 1000 g durante
HOJA DE Trabajo DE Aglutinacion
Asignatura: Inmunología I
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