- Information
- AI Chat
Rapport de stage - infirmiers
biologie moléculaire (https://www.studocu.com/fr/u/1847313)
Université de Batna 1
Preview text
Rapport de
stage
Laboratoire d’analyses médicales à l’Hôpital Hassan 2, Agadir Réaliser par : Hamid AIT HASSI ABOU Encadré par : Mme. Jamila SARDI et Mme. Fatima BENLMELIANI
Introduction
Un laboratoire d'analyse médicale (ou laboratoire de biologie médicale) est une structure où des professionnels de la santé prélèvent et analysent différents fluides de l'organisme. Il peut s'agir de prélèvement de sang, de peaux, d'urines, de selles ou de muqueuses. Un laboratoire de biologie médicale peut être hospitalier ou privé. Il regroupe de nombreux professionnels de la santé tels que des infirmiers, des techniciens de laboratoire, des biologistes et plus rarement des médecins. Les analyses biologiques sont réalisées sur des échantillons prélevés sur les patients dans des conditions strictes, car, en biochimie comme pour les autres spécialités de la biologie, le(s) constituant(s) à doser ou à caractériser ne doi(vent) pas subir de modification qualitative ni quantitative entre le recueil et l'analyse proprement dite. Le déroulement du processus qui s'écoule entre prescription et analyse, appelé phase pré-analytique, comporte la préparation du patient et du matériel, l'acte de recueil d'un échantillon représentatif, sa conservation et son transport. Cette phase se décompose en deux étapes, l'une souvent externe au laboratoire et l'autre se déroulant à l'intérieur du laboratoire. La première est prise en
charge par le prescripteur et le préleveur dont les rôles s'arrêtent lorsqu'ils se sont assurés que les échantillons étaient parvenus au laboratoire dans un état conforme à l'attente du biologiste. La deuxième partie, interne au laboratoire, devrait désormais débuter par une validation de la qualité du prélèvement ; les techniques de conservations sont nombreuses et leur choix est du domaine de compétence du biologiste. La maîtrise de la qualité des analyses biologiques implique la maîtrise du processus de cette phase dans sa totalité, incluant la compétence des intervenants.
sommaire
####### CHAPITRE I
I. TECHNIQUES SANS MARQUAGE
Méthodes de précipitation 1-1 Précipitation en milieu liquide : 1-2 Précipitation en milieu gélifié :
Agglutination immunologique 2-1 Théorie de l'agglutination : 2-2 Conditions expérimentales : LES DIFFÉRENTS TYPES D’AGGLUTINATION : Agglutination ACTIVE : Agglutination PASSIVE : Agglutination DIRECTE : Agglutination INDIRECTE ou ARTIFICIELLE : Modalités techniques des réactions d'agglutination :
Radio-immunologie, immun enzymologie 1- Principes : 2- Méthodes : 2 Analyse par méthode indirecte (ELISA indirect) : 2 Analyse par compétition : 2 Analyse immunométrique :
####### CHAPITRE II :
I. LA PHASE PRE-ANALYTIQUE II. PHASE ANALYTIQUE Exemple Sérologie
- Sida
- syphilis
- Marqueurs tumoraux
rapport de stage au laboratoire d'analyses médicales : CHAPITRE I by probio on avril 25, 2018 in Biologie médicale, immunologie
CHAPITRE I
TECHNIQUES D’IMMUNOANALYSE La spécificité de la réaction Ag-Ac permet :
- la recherche, l'identification ou le dosage de toute molécule capable d'induire la production d'anticorps
- la recherche, l'identification ou le dosage d'anticorps grâce à l'antigène correspondant. Liaison Ag-Ac--->Réaction équilibrée Réaction réversible. Lors de la réaction Ag-Ac, deux cas peuvent se présenter : On peut observer la survenue de phénomènes secondaires, physiques ou biologiques,inconstants mais visibles d’où différents types de technique :
- Précipitation
- Agglutination immunologique
Immun néphélémétrie laser= Mesure de la diffusion de la lumière sous un angle différent de zéro (par rapport à l’axe de propagation de la lumière incidente) Les particules dispersant la lumière sont des complexes immuns précipités en milieu liquide. Il existe donc une relation entre l'intensité de la lumière mesurée par néphélémétrie et la quantité de précipité Ag-Ac. Le dosage d’un Ag s’effectue par précipitation avec l’immun sérum spécifique et par référence à une courbe d’étalonnage préétablie avec des solutions d'Ag de concentrations croissantes connues. (Dosage de nombreuses protéines du sérum IgG, IgM, IgA, protéines du complément, ApoA et B...). Le test est peu sensible (seuil 0,5mg/ml). Une variante permet de baisser le seuil de détection en utilisant des microparticules (latex par ex) sur lesquelles sont fixés des Ac (dosage des IgE). 1-2 Précipitation en milieu gélifié : Analyse qualitative de mélanges d’Ag, Immunodosage d’un Ag.
- Les solutions d’Ag et d’Ac diffusent dans le milieu gélifié à partir de réservoirs-- >gradients réguliers de concentrations décroissantes
- A l’équivalence, précipitation du complexe Ag-Ac, le précipité retenu dans les mailles du gel sera lavé et éventuellement coloré.
- Agglutination immunologique Agglutination immunologique = réunion en amas de particules à la suite d'une réaction Ag-Ac(suspension homogène de particules puis agrégats visibles à l'œil nu). Restriction : Ag particulaire Hémagglutination : repose sur la capacité de l’anticorps à agréger les GR grâce à la présence d’antigène à leursurface. 2-1 Théorie de l'agglutination : Réaction complexe qui met en jeu des modifications des charges électriques à la surface des particules empêchant leur agglutination spontanée. 2-2 Conditions expérimentales : Anticorps agglutinants :IgM surtout (10 à 100 fois plus que IgG) Densité des sites antigéniques :relations entre agglutinabilité et densité en sites antigéniques. Facteurs expérimentaux : température, pH (6 à 8), force ionique. LES DIFFÉRENTS TYPES D’AGGLUTINATION : 1 : Définition : agglutination résultant d’une union spécifique entreun anticorpset un antigèneparticulaire appartenantnaturellement à la particule.
L'antigène est situé sur la face externe de la particule, sur une membrane cellulaire ou bactérienne, directement accessible par l'anticorps. Détermination des groupes sanguins Agglutination de bactéries (typage des salmonelles etc...) 4 INDIRECTE ou ARTIFICIELLE : Définition : agglutination réalisée entre unanticorps non agglutinantet unantigène(généralementparticulaire)avec utilisation d’un artifice. Utilisation d'artifices techniques permettant de favoriser l'agglutinationou permettant la détection d'anticorps non agglutinants. Substances macromoléculaires : Albumine, polyvinylpyrolidone, dextran Enzymes protéolytiques : Papaïne, pepsine, broméline 5- Modalités techniques des réactions d'agglutination : Réaction sur lame, en tubes, en microplaque, étude quantitative.
####### 3. Technique utilisant le complément
1- Etude du complément : A Réaction d'hémolyse :
Basée principalement sur la réaction d’immuno-hémolyse = le complément se fixe sur les complexes Ag-Ac et provoque la lyse de la membrane cellulaire des hématies. 1 Le système hémolytique : = globules rouges de mouton / sérum de lapin anti-globules rouges de mouton Mises en présence de complément (présent dans un liquide biologique à étudier) ces hématies sensibilisées vont être lysées--> libération de l’hémoglobine et lecture photométrique. Relation entre le degré d’hémolyse et quantité de complément présent dans le liquide. 1 Applications : Dosage du complément (et de ces composants) dans un liquide biologique. 2- Réaction de fixation du complément : 2 Principe : 2 Applications : Sérodiagnostics d’infections bactériennes, virales, parasitaires par recherche et titrage d’Ac spécifiques présents à des concentrations inférieures à 1 mg/ml. Détection des Ag d’histocompatibilité de classe I et II (groupage HLA) par la réaction demicrolymphocytotoxicité
- les lymphocytes sont mis en contact avec une “batterie”d’Ac anti-HLA de spécificité connue, pré-déposés dans les puits d’une plaque,
- après incubation on ajoute du sérum de lapin (= source de complément)
- les lymphocytes sont lysés dans les puits où les Ac se sont fixés sur les Ag HLA
I. TECHNIQUES DE MARQUAGE La réaction antigène-anticorps est rendue visible par un marquage préalable de l'antigène, de L’anticorps ou d'une anti-globuline (anti-Ig ou anti-C). Différents marqueurs sont utilisés :
- corps fluorescents : immunofluorescence (IF)
- enzymes : immuno-enzymologie (EIA)
- éléments radioactifs : radio-immunologie (RIA) Marquage des antigènes et des anticorps
Dans les réactions utilisant un marquage, le problème est de pouvoir distinguer le corps marqué qui a réagi dans la réaction Ag-Ac, de celui qui est resté libre. En fonction de la modification ou non de l'activité du marqueur enzymatique lors de la réaction Ag-Ac, on a les deux schémas réactionnels : Dansles techniques en phase homogène, l'activité du marqueur est modifiée par la réactionAg-Ac (extinction du signal) et permet de révéler directement le développement de la réactionAg-Ac. L'Ac = réactif liant et révélateur de la formation du complexe spécifique d'où uneétape de séparation inutile. Dansles techniques en phase hétérogène, le comportement du marqueur est inchangé par laréaction Ag-Ac ; une étape de séparation est obligatoire entre les complexes Ag-Ac marquésformés d'une part et l'Ag ou l'Ac marqué resté libre d'autre part, avant la lecture du signalfixé.
####### 1. Immunofluorescence
Méthode qui utilise un marquage par un corps fluorescent pour déceler une réaction Ag-Ac. On marque l'anticorps ou l'antigène ou encore un réactif réagissant avec le complexe Ag-Ac. A- Principes fondamentaux A La fluorescence : = Phénomène physique : absorption d’un rayonnement par une molécule et émission d’une lumière de plus faible énergie.
Antiglobuline fluorescente révélatrice de la fixation de l'anticorps du premier temps (= deux réactions Ag-Ac successives). Mise en évidence de l'antigène, Mise en évidence d'Ac dans le sérum. C Cytométrie de flux : Numération de cellules exprimant des Ag au sein d'une suspension hétérogène : Les cellules de l'échantillon sont marquées avec des réactifs fluorescents qui se fixent Spécifiquement à des molécules de la surface cellulaire (ex : anti-CD4, anti-CD8...) Les cellules sont entraînées dans une veine liquide. Chaque cellule passe devant un faisceau laser. Le système mesure la diffusion de la lumière aux petits angles, à angle droit et lesintensités de fluorescence pour trois longueurs d'ondes différentes. Grâce à des filtres et desphotomultiplicateurs, l'appareil enregistre l'intensité de fluorescence de chaque cellule passantdevant la source laser. Les résultats sont présentés sous la forme d'histogrammes. Permet une analyse Multiparamétrique en déterminant pour chaque cellule, la taille, la granulosité, l'intensité de fluorescence avec différents fluorochromes.
####### 2. Radio-immunologie, immun enzymologie
1- Principe :
Met à profit le signal émis par les molécules marquées par un radio-isotope :RIA = Radio Immuno Assay ou une enzyme :ELISA = Enzyme Immuno SorbentAssay. Permet la mise en évidence et le dosage de substances présentes en très faible quantité dans les milieux complexes, en associant l'utilisation de la spécificité très stricte de la combinaisonAg-Ac mise en jeu dans la réaction et l'introduction d'un signal très sensible marquant cettecombinaison. Radio-immunologie : Révélation du complexe Ag-Ac radioactif par un compteur Immuno-enzymologie : Révélation du complexe Ag-Ac marqué par l’enzyme par mise Enprésence du substrat spécifique de cette enzyme. 2- Méthodes : 2 Analyse par méthode indirecte (ELISA indirect) : Permet le dosage d’anticorps.
- l’échantillon contenant l’Ac primaire (Ac1) est déposé dans un puits où est adsorbé L’antigène, avec lequel il réagit,
- après lavage, la présence de l’Ac1 est détectée en ajoutant un Ac secondaire (Ac2) Anti-isotype conjugué à un enzyme,
- l’Ac2 libre est éliminé par lavage, et un substrat de l’enzyme est ajouté
- la quantité de produit coloré est mesurée par un lecteur spectrophotométrique approprié. 2 Analyse par compétition : On dispose :
Après des lavages, le signal fixé est mesuré, il est proportionnel à la concentration d'Ag à doser par référence à une courbe d'étalonnage. rapport de stage au laboratoire d'analyses médicales : CHAPITRE II by probio on avril 25, 2018 in sérologie
CHAPITRE II :
I. La phase pré-
analytique
C'est la première phase de l'analyse médicale. Elle comprend l'état du patient (à jeun ou non), la phase de prélèvement, celle de l'étiquetage des échantillons prélevées, de l'enregistrement des demandes d'analyses, de la centrifugation des prélèvements et de leur prétraitement éventuel (décantation). Pendant cette étape un certain nombre d'opérations peut fausser les résultats, c’est pour cela que lorsque le laboratoire reçoit des prélèvements non conformes à ses spécifications, il se doit d’entreprendre toute action corrective visant à améliorer la qualité des prélèvements reçus. Il faut mentionner que la couleur d’un tube indique la nature et le service capable d’analyser ce dernier, comme dans le tableau ci-dessous : Rouge Biochimie, Sérologie
Violet Hématologie, Biologie moléculaire, Immuno-phynotypage,Sérologie Bleu Hémostase Noire Vitesse de sédimentation, Groupage
Tableau : la couleur courante pour le
service dans le laboratoire
1-L’enregistrement du patient : Où? À l’accueil .. ?Numéro d’enregistrement et code identifiant Pour les laboratoires qui disposent de SIGL(Système Informatisé de Gestion des données) Dans tous les cas : numéro/code reporté sur tous les prélèvements du patient. 2-Salle de prélèvement : Salle il faut être propre aérée ayant une bonne luminosité, et différente des salles de manipulation.
Rapport de stage - infirmiers
Course: biologie moléculaire (https://www.studocu.com/fr/u/1847313)
University: Université de Batna 1
This is a preview
Access to all documents
Get Unlimited Downloads
Improve your grades
